熒光顯微鏡標本制作特點和觀察要求

　　(1)載玻片：載玻片厚度應在0.8—1.2mm之間，玻片太厚吸收光多，激發光難以在標本上聚集。載玻片必須光潔，厚度均勻，無明顯自發熒光。有時需用石英玻璃載玻片。

　　(2)蓋玻片：蓋玻片厚度應約0.17mm，光潔。為加強激發光，也可用幹涉蓋玻片，這種特制蓋玻片的表面鍍有若幹層對不同波長的光起不同幹涉作用的物質(如氟化鎂)，它可以使熒光順利通過而反射激發光，這種反射的激發光可激發標本中的熒光。

　　(3)標本：組織切片或其他標本不能太厚，一般以5～20pm為宜，切片太厚可使激發光大部分消耗在標本下部，而物鏡直接觀察的標本上部不能被激發。切片折疊或雜質過多均可影響熒光的觀察。

　　(4)封片劑：封片劑必須無自發熒光、五色透明。加上抗淬滅劑後再用指甲油(實際操作中體會指甲油封片效果很好，可做到薄而均勻)將蓋玻片四周封固，既保持蓋玻片不滑動，又能防止抗淬滅劑蒸發。在沒有抗淬滅劑的情況下，也可使用含30%甘油的PBS，還可用甘油與0.5mol/L碳酸鹽緩沖液(pH 9.0～9.5)等量混合液作封片劑。

　　(5)鏡頭的清潔：在油鏡使用完畢後，需用擦鏡紙沾上無水乙醇或3：7的醇醚混合液輕輕擦拭。

　　(6)及時觀察：標本染色後應及時觀察，因時間過長熒光會逐漸減弱。若標本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時間。